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FISH(荧光原位杂交)

发表时间:2022-02-22  |  点击率:290

FISH(荧光原位杂交)

荧光原位杂交用于通过互补探针序列的杂交来显示确定的核酸序列。FISH 有很多应用,从基本的基因定位到染色体畸变的诊断(细胞遗传学)。多色 FISH 图像分析需要使用单独的滤光片激发块(立方体)或激发滤光片转轮结合多波段二向色镜和发射滤光片来隔离各种信号。

荧光免疫原位杂交(FISH)和 多路复用(Densely Multiplexed)成像的串色

当同时使用具有多个密集光谱的荧光染料时,区分荧光标记的能力决定了检测结果的速度和准确性。在进行荧光免疫原位杂交 (FISH)测量时,这种密集的图像复用特别重要。因此,减少串色(即来自不希望的荧光染料的信号相对于所需荧光染料的信号影 响)至关重要。下表量化了使用特定的
BrightLine 荧光免疫原位杂交(FISH)滤光片组时,相邻荧光染料之间的串扰值。该串扰值 决定于典型的归一化荧光染料光谱、滤光片的设计光谱和强金属卤化物灯光谱的重叠。

这些结果已经针对每个给定的滤光片组进行了标准化,因此用户应该读取每行(而不是每列)的值以查看给定滤光片组的预期串扰值。

例如,当使用 SpectrumGold™ 滤光片组对标记有 SpectrumGreen™、SpectrumGold™ 和 SpectrumRed™ 荧光染料的样品进行 成像时,不需要的 SpectrumGreen 信号将小于所需要的 SpectrumGold 信号的 2%,并且 SpectrumRed 信号将小于1%。

好的滤光片会带来哪些不同 ?

BrightLine“不易烧熔"滤光片在多年的使用中,在研究和临床领域都得到了广泛的测试。BrightLine 荧光免疫原位杂交 FISH 滤光片组也进行了严格的独立测试。结果显示:使用 BrightLine 滤光片组进行荧光免疫原位杂交 FISH 分析时,无论您是查找 和分析中期分裂,还是通过点计数对细胞进行评分,都可以提高分析的速度和准确性。

荧光滤光片简介

一个分子吸收其吸收谱带波长范围(即吸收光谱)内的光,然后几乎瞬间发出较长的、位于其发射谱带波长范围(即发射光谱)内的光,此时,就会发生光学荧光。为了达到分析的目的,强的荧光分子,亦被称为荧光团、荧光染料,专门用于连接到生物分子或其他感兴趣的目标,用于鉴定、定量、甚至实时观察物质的生物和化学活性。荧光染料因为具有*的灵敏度、高特异性和简单性,被广泛应用于生物技术和分析检测中。大多数荧光仪器,包括荧光显微镜,都是基于光学滤光片。

一个典型的系统有三个基本的滤光片组成:激发滤光片(或吸收滤光片),二向色镜分束镜(或二向分色镜)和发射滤光片(或阻挡滤光片)。激发滤光片通常是一个带通滤光片,它只透过荧光染料的吸收波长,从而最大限度地减少荧光的其他来源的激发光和阻挡荧光发射带内的激发光。二向色镜分束镜是一种边缘滤光片,用于斜角入射 (通常是 45 °),以有效地反射激发波段的光和透射发射波段的光。Semrock 发射滤光片通常是一个带通滤光片,仅透过荧光染料的发射波长,并阻挡这个波段之外的所有不需要的光 - 尤其是激发光。通过滤光片阻挡不需要的激发能量(包括紫外和红外)或样品和系统的自发荧光,就可以得到具有黑暗背景的荧光图像。

我们可以通过选择适当的光学滤光片,组成一个滤光片组,用于观察荧光或者对荧光进行成像,这样就可以达到使一个给定的荧光染料可视化的目的。因为不同荧光染料的激发光谱和发射光谱不同,滤光片组需要优化,才可以用于不同荧光染料的同时成像。在不同的实验条件下使用同一个荧光染料时,滤光片组也需要优化。




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